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MBTS4UE03-Accompagnement 5
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produit de la PCR dont la taille est définie par un couple d’amorces amorce qui a la même séquence que l’extréminté 5’ du brin sens et qui se lie donc à l’extrémité 3’ du brin anti-sens nom anglais de l’amorce qui se lie à l’extrémité 3’ du brin sens nombre de cycles de PCR qu’il a fallu faire pour que la fluoresence dépasse le bruit de fond/seuil nom de la phase de la cinétique de la PCR au cours de laquelle on peut mesurer 4 la PCR en point final ne peut pas l’être peuvent se former si les amorces ont des parties de séquences complémentaires fluorochrome vert intercalant de l’ADN utilisable pour suivre l’amplification en temps réel Principe sur lequel est basé l’utilisation des balises moléculaires ou sondes TaqMan Type de PCR permettant d’augmenter la spécificité de l’amplification via une seconde PCR sur les produits de la première avec un couple d’amorces plus internes Type de PCR estimant la quantité d’amplicon à chaque cycle On obtient des amplicons double brins à la taille désirée à partir de ce cycle de PCR L’ADN polymerase utilisée pour la PCR doit l’être Ordre de grandeur du nombre de copies d’une séquence amplifiée obtenues après 20 cycles de PCR Dans la méthode de calcul des delta Ct on émet l’hypothèse que celle de l’amplification de la cible et du contrôle endogène est de 100% Un cofacteur important pour le bon fonctionnement de l’ADN polymerase Doit précéder la PCR si on veut l’utiliser pour mesurer l’expression génique Ces séquences sont présentes dans l’ADNg mais pas dans l’ADNc Instrument permettant de réaliser les cycles de température et la mesure de fluorescence au cours de la PCR Phase de la cinétique de la PCR atteinte lors de la vérification des amplicons avec la technique de PCR point final Méthode utilisée pour évaluer les résultats de la PCR classique Méthode de quantification basée sur l’utilisation d’une gamme étalon Échantillon utilisé comme référence pour comparaison avec les autres dans la méthode de quantification relative L’expression du gène utilisé comme contrôle endogène pour la quantification doit globalement l’être quels que soient les traitements expérimentaux testés sur les différents échantillons